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荧光显微镜的原理和作用介绍

发布时间:2022-05-25      点击次数:668
荧光显微镜(Fluorescence microscope) : 荧光显微镜是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光的原理是某些物质会在高强度的短波长光线照射下,会发出波长稍长的发射光(荧光)。
而我们一般都是观察被激发荧光基团所发射出来的波长稍长的发射光(荧光)。
但是激发的光会很强,所以我们就需要把激发的光全部滤去,这样才可以看到荧光基团的发射光(荧光)。
荧光显微镜一般都用高强度的汞灯做激发光源。使用滤色片把不需要的光滤去,只留下激发荧光集团的高强度很纯的光线。这个单色的光线通过物镜照射到样本上之后,样本会被激发出发射光(荧光),荧光和激发光都会沿着物镜光路返回,这样的话,就需要用一个二相色镜把激发光滤去,只让我们需要看到的荧光透过。
这个荧光沿着显微镜的光路*后到达目镜下,然后进入我们的眼睛,我们就可以看到荧光基团所发出来的荧光了。
注:在荧光显微镜中,核心的是 1 荧光光源,因为荧光需要高强度的光才可以被激发出来,我们一般都用汞灯,另外还有长寿命金属卤素灯,当然还有激光。2 激发块(几个滤色块组成的组件,一般有激发光滤色片、二相色镜、发射光滤色片),因为我们的荧光基团都是在特定波长的光线下才可以激发,并且被激发的发射光也具有特定波长。所以需要选择合适的激发块(主要是选择激发光滤色片、二相色镜、发射光滤色片这三个的可以通过的光线波长等参数)。
另外物镜也对荧光显微镜有很大影响。因为只有高档次的物镜才可以提供完好的色差矫正。 
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