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荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别

发布时间:2022-09-21      点击次数:145

首先我们来简单了解一下荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的工作原理。
荧光显微镜(Fluorescence microscope) :荧光显微镜是以紫外线为光源,样品自身发光或者经过荧光染料或荧光抗体染色处理之后,照射被检物体,受紫外激发产生荧光,探测器检测,在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。

激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM):全称是激光扫描共聚焦荧光显微镜,是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据,以激光作为光源,逐点激发样品内荧光,采用精密针孔滤波技术,有效抑制了非聚焦平面的杂散光,具有层析成像能力和很高的成像信噪比。在荧光显微镜的基础上添加了激光扫描装置,激光从发射器发出,在照明针孔分成三束,经过分光镜反射,在物镜处折射,聚焦于样品的焦平面上,如果样品中有被激光激发的荧光基团,就会产生荧光,按照激光进入的光路原路返回,返回的荧光在成像系统(一种可以把光信号转化为电信号传感器)中再次聚焦成相。因为在两个位置(样品和成像系统)聚焦,所以叫做共聚焦。

荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别

荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别。

荧光显微镜又叫宽场荧光显微镜,当成像面较厚,焦面上方下方的干扰信号都会被观察到,影响实验结果,因此荧光显微镜只能观察静态的亚细胞结构
激光共聚焦显微镜是在传统荧光显微镜成像的基础上,附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置,通过计算机控制来进行数字化图像采集和处理的系统。可以观察亚细胞层次的一些生化变化,是目前先进的分子细胞生物学的分析仪器。
激光共聚焦显微镜比普通荧光显微镜获得更高对比度、高分辨率图像,同时具有高灵敏度,对检测样品无损伤、可靠和优良重复性。激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时可观察并可形成清晰的三维图像等优点,能比宽场看到的成像面更薄,更清晰,在较以往更短的采集时间内轻松实现超高分辨率更大观察视野成像。

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荧光显微镜

激光共聚焦显微镜

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